高效液相色谱仪器和技术相关的最新进展综述

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我国目前的现状是:做仪器的人,他不知道使用者在如可使用仪器,他不知道使用者对仪器的具体要求;而使用者他不知道制造者在如可制造仪器,他不知道仪器的性能指标的物理意义、对分析误差的影响。什么都有有,不忘初心,牢记使命,制造仪器和使用仪器的科技工作者紧密结合非常重要。本文简单介绍了高效液相色谱仪器和技术相关的最新进展。

No.1、HPLC仪器工作原理、底部形态组成

HPLC的工作原理:样品进入输液系统(泵)→进样系统→分离系统(柱)→检测系统→数据外理系统→打印输出结果。

工作原理图如下图所示:

No.2、底部形态组成及各个部件的重要性

HPLC一般完全一定会由输液系统(泵)、进样系统、分离系统(柱)、检测系统、数据外理系统组成。各每项简述如下:

1、输液系统(高压泵)及其重要性

高压泵是关键部件之一,按原理分为一种生活生活类型:一类是恒流泵,一类是恒压泵。

恒流泵,无论色谱柱的阻力如可变化、无论外界有何影响,它输出的流动相的流速都需要基本保持不变,这正好是HPLC系统工作的基本要求;而恒压泵输出的基本上是恒定不变的压力,在正常情况表下,导致 HPLC系统的阻力不让变化,什么都有有恒压也都需要达到恒流的效果。但会 导致 色谱柱、温度等导致 会有变化,什么都有有导致 导致 流量变化,这是HPLC使用者不希望看得人的结果。

什么都有有一般来讲,恒流泵比恒压泵好(横流泵的使用多于恒压泵)。目前我国有近20家企业在生产各种不相似于型的HPLC,但会 基本上完全一定会采用恒流泵;相似于:北京普析公司的L5000系列、北京东西电子的LC-5510、北京瑞利公司的SY-85000、大连依利特公司的55000、上海伍丰公司的LC5000、上海仪电公司的LC210、浙江福立公司的LC1190等等仪器完全一定会采用的高压恒流泵输液。

高压泵的质量直接影响整个HPLC的质量,是用户关注的核心部件之一。HPLC高压泵的重要性及使用者对高压泵的具体要求如下:

(1)耐高压

耐高压是HPLC系统对高压泵的基本要求之一,一般来讲,平均粒径为4µm左右的填料、内径为5mm左右的色谱柱,当流动相流速为1-3mL/min时,要求输液泵的最高工作压力达到34.47-41.36Mpa(50000-50000psi);目前国际上商品HPLC泵的最高工作压力一般为41.36Mpa(50000psi)左右。但随着填料粒径的不断减小,粒径为1-2.5µm范围的小粒径无孔色谱填料的应用推广,流动相在色谱柱中的阻力会更大,什么都有有,5004年国际上再次出现了超高压液相色谱,要求输液泵里能 耐更高的压力。目前市场上已有达到68.94Mpa(500000psi)的高压恒流泵(如:Altex 5000A)。

(2)稳定性好、脉动小

输液高压泵的稳定性和脉动大小会直接影响HPLC系统的稳定性(漂移和重复性)、影响系统的噪声、降低灵敏度,不得劲是HPLC系统采用电化学检测器和示差等检测器,或进行梯度分离时更加重要,但会 目前国际上什么都有有高压泵的压力脉动都都需要控制在1%以内。

(3)流量连续可调、流量范围宽

目前国际上HPLC的高压泵,大多数流动范围都需要达到0.001-10.0mL/min(制备色谱的流量更大,有需要求达到数千mL/min),都需要一起满足各种不同内径的色谱柱的分析工作要求。

(4)流量重复性好

什么都有有HPLC的泵的流量重复性都需要达到0.07%(RSD)。但会 重复性与测试妙招有关,目前国际上一般采用一种生活生活妙招测试:一是重量法,收取泵的单位时间里的流出液,在天平上直接称其重量,判断重复性;二是保留时间法,根据保留时间的长短,来判断流量的重复性。在HPLC的分析工作中,其定性分析一般是根据保留时间。高压泵的重复性(RSD)是极其重要的指标之一,也是影响HPLC整机系统重复性的一项非常重要的性能技术指标。

(5)死体积小

高压泵的死体积会影响HPLC的分析精密度和准确度,不得劲是影响梯度洗脱的效果,一般老是 希望死体积越小越好。导致 高压泵的死体积小,有助溶剂的快速置换,但会 有助把系统的气泡及时排出。

(6)流量准确度高

HPLC高压泵的流量准确度不得劲要,直接影响分析测试数据的重复性(可靠性)。目前国内外HPLC的泵流量重复性一般在1%左右(与测试妙招有关),最好的可达到0.06%(采用保留时间法;如美国waters、日本岛津、中国普析通用的高压泵等但是找不到)。

(7)具有梯度洗脱功能

目前国际上的HPLC仪器,一般都具有梯度洗脱功能;导致 ,往往等度洗脱只有外理的分析工作,导致 采用梯度洗脱的妙招,本来导致 很好的外理现象。但会 ,HPLC的使用者,往往需要仪器的高压泵具有流速多线程 池池和梯度洗脱多线程 池池。

除上述几点外,对HPLC的高压泵的要求还有耐用、流速可控程、具有压力检测保护功能、维修方便等。虽说完全一定会所有的泵完全一定会求具有上述要求,但会 什么都有有泵具有那此功能,相似于:美国waters公司的Alliance系列、美国Agilent公司的1500系列;中国北京普析通用公司的L5000系列、大连的依利特公司的P2500系列、上海伍丰公司的LC-5000系列和浙江福立公司的LC1190系列高压泵等,基本上都具有那此功能,一般都能满足液相色谱分析工作的要求。

2、分离系统(色谱柱)

让没找不到人歌词 歌词 歌词 一般所讲的分离系统主要指色谱柱及其附件,它是一个 非常重要、非常简化的核心每项。一般液相色谱柱的底部形态如下图所示,包括柱管(大多采用不锈钢制作)、填料(顶端将完全讨论)、接头(一般用不锈钢制作)、卡套(一般用不锈钢制作)、压帽、封口环、滤片、螺丝(一般用不锈钢制作)、连接管道(一般用不锈钢制作)等等。

HPLC的色谱柱主体组成(底部形态)如下:

1)色谱柱底部形态:色谱柱主体组成一般如下图所示:

图中:1-色谱柱的塑料保护头;2-柱头螺丝;3-刃环;4-封口环;5-滤片(筛板);6-柱体(不锈钢管);7-色谱柱填料。

色谱柱的筛板(过滤板)一般是用不锈钢或钛合金材料制作,其孔径一般在0.2-20μm之间,孔径大小主要取决于柱填料的粒度,它是一个 非常重要的零件,它都需要外理填料漏出。一起,外理色谱柱工作时杂质进入柱内引起分离效果下降,甚至容易引起色谱柱堵塞等等。色谱柱与输液管连接处一般需要使用不锈钢制作的卡套和不锈钢制作的固紧接头螺钉,它们也非常重要,但会 色谱柱系统会漏液,结果使柱压下降、流动相或样品漏出,严重影响分析测试结果,甚至只有进行分析测试工作。

2)色谱柱分类:

从类型上来说,色谱柱都需要分为制备型和分析型两大类,一般分析型的柱使用最多。导致 细分,色谱柱又都需要分为常规柱、窄径柱、毛细管柱、制备柱和半制备柱等等。为提高分析速度,找不到人老是 使用短柱,其柱长5-10cm,填料粒径多为3μm左右。什么都有有分析工作者比较强调分析灵敏度,但会 发展了窄径柱、毛细管柱和微径柱。那此柱子的优点是:所需样品少、所需流动相少、灵敏度高、容易控制温度。但会 它们对检测器的流动池、柱外的管道、接头、进样阀等要求大大提高了。

色谱柱的柱效是最重要的关键指标,一般都取决于固定相的性能和装柱技术。一般HPLC的色谱柱固定相(填料)大致有一种生活生活:硅胶或以硅胶为基质的填料、聚合物填料和无机物填料。正相色谱柱大多采用硅胶类填料,反相色谱柱则多以硅胶为基质组成的官能团类的填料。以聚合物为填料的色谱柱最大的特点是PH值可在1-14之间都能用,疏水性强。但无机填料色谱柱一般但是限于特殊用途,比较少用。

导致 HPLC的样品都为溶液,而溶液受温度影响很大,相似于:温度对溶剂的溶解能力、色谱柱的柱效、流动相的粘度一定会产生影响。导致 温度升高,导致 会提高溶液在流动相中的溶解度,都需要降低分配系数K;降低流动相粘度都需要降低柱压,有助保护色谱柱,延长色谱柱的寿命。但会 ,温度只有太高,但会 会产生气泡。

HPLC工作者还需要注意不同的温度,对色谱柱的保留时间、分离效果,及检测器的灵敏度一定会有影响,不得劲是对示差折光器的灵敏度、最小检出限的影响很大。什么都有有,什么都有有HPLC不得劲注意对恒温系统的设计,那此完全一定会HPLC设计者、使用者应该重视的现象。

作者的长期实践证明:色谱柱的技术含量很高,它除了与色谱柱的底部形态有关外,更加重要的还有:既与固定相的性能有关,又与装柱时的填充料和填充技术有关。你这俩 使用者根据使用要求每所有人装色谱柱,大多数使用者完全一定会使用导致 装好的商品色谱柱。不管是哪种柱,在使用前一定要对色谱柱进行认真的考察;使用期间或放置一段时间后,也要重新检查、测试。你这俩 现象目前国内什么都有有HPLC使用者很不了解或很不重视;让没找不到人歌词 歌词 歌词 以为买来的色谱柱,一定但是合格的、好用的色谱柱,并他不知道它还有与系统与非 相匹配的现象;他不知道它会对前面的高压泵、顶端的检测器有那此影响等等。什么都有有在使用过程中,老是 磕磕碰碰,只有得到最佳的分析结果。

HPLC的色谱柱(分离柱)是极其重要的部件之一,根据填料的不同一般可分为:反相柱、正相柱、其它柱三类,分别简述如下。

(1)反相色谱柱:它是使用最多的一种生活生活色谱柱;一般约占75%左右;其中,C18柱约占65%;C8柱占15%左右;苯基柱<5%。反相色谱是目前应用得最为广泛的一种生活生活高效液相色谱妙招。C18在反相色谱中应用得最为广泛,大约 超过一半以上。

(2)正相色谱柱:正相色谱柱也老是 被使用,约占20%左右。

(3)其它色谱柱(手性柱,离子交换柱):约占10%左右。

要用好、保护好色谱柱,是一个 需要不得劲重视的现象,导致 稍有不慎,完全一定会导致 降低色谱柱的柱效、缩短色谱柱的寿命,甚至损坏色谱柱。

3、检测系统

检测器种类什么都有有也非常重要,但会 使用最多的是光学类检测器,占比约75%左右,这里重点光学类检测器。

1)光学类检测器基本功能:提供准确的波长、提供足够小的检测限(灵敏度,这是用户最关心的现象之一)、提供小的噪声、飘移和重复性,给出最终检测结果。

2)最常用HPLC检测器的类型

在国内外的科技界,什么都有有色谱工作者认为高压泵和色谱柱是HPLC的核心,检测器但是一种生活生活光谱仪器,找不到分离就不成为色谱。什么都有有,通常认为高压泵和色谱柱最重要。而光谱工作者认为光谱仪器是HPLC的核心,找不到它,分析检测结果那此也他不知道,高压泵但是输液、色谱柱但是分离,关键要靠检测器检测才有测试结果,什么都有有检测器最重要。作者认为上述一种生活生活说法完全一定会完全正确,应该说HPLC系统中每个每项都重要,千万只有偏看哪个每项,但会 将得只有可靠的分析检测数据。

目前,国内外科技工作者最常用的检测器有以下几种:溶解光检测器、分子荧光检测器、示差折光检测器、各类紫外可见光谱检测器、各类质谱检测器、各类AAS(原子吸收光谱)检测器、各类原子荧光检测器等等。在各类联用技术中,凡与HPLC的泵、柱联用的仪器,都都需要称之为检测器。

3)光学类检测器的主要技术指标:

光学类检测器是所有检测器中使用最多的一种生活生活,它的主要技术指标如下:

(1)波长范围:长波和短波两端决定仪器的适用范围,限制或决定仪器的适用性。相似于:一般只有氘灯的紫外检测器,就只有测试吸收峰在618nm的强致癌物质孔雀石绿,以及吸收峰在500nm的紫外吸收物质,导致 氘灯找不到618nm这根谱线,而在500nm时能量弱、信噪比差。

(2)波长准确度:影响摩尔吸光系数、影响仪器的灵敏度,比较仪器时不得劲要。

(3)波长重复性:影响分析数据的重复性。

(4)光谱速度:让没找不到人歌词 歌词 歌词 不大注意,它是分析误差来源之一,一般采用谱线轮毂法测试。

(5)噪声:非常重要,一般光谱仪器有多大的噪声,本来导致 在测试结果中增加多大的误差。

你这俩 仪器采用软件平滑噪声,作者认为完全一定会好妙招。导致 平滑时一是信号也损失了一每项,二是硬件的噪声并找不到加在。测试结果皮层上噪声小了,觉得信噪比找不到变化。什么都有有,作者认为应该从算法上着手,采用目前国际上一种生活生活最先进的利用软件、算法降噪技术,你这俩 技术只降噪声,不影响信号,这是光谱仪器研发工作者应该重视的现象。

(6)稳定性(含漂移、重复性):它直接限制光谱仪器的可靠性。

(7)光度范围:应该注意2个浓度范围内能给出准确数据。

(8)量程:应重视最灵敏量程,只有用最几瓶程测试仪器的灵敏度(顶端将有论述)。

4)几种不得劲值得重视的HPLC检测器

(1)最常用的:紫外检测器(UVD)(占70%左右)、荧光检测器(FLD)(占10%)、视差折光检测器(RID)(占3%)、你这俩 检测器(如质谱等等,占17%)。

(2)还有目前使用非常多的、质量型检测器:溶解光散射检测器--ELSD,(已上药典,都需要替代RID)。

(3)用户目前不得劲关注的新型检测器:质谱检测器、化学发光检测器、放射性检测器、光电导检测器、旋光检测器、电喷雾检测器(最新的质量检测器,顶端还将完全讨论)等等。

No.3、HPLC关键性能技术指标的测试

1、灵敏度的测试妙招

HPLC的灵敏度可定义为:一、定量的物质,通过HPLC的检测器时,仪器所给出的信号大小就叫做该HPLC的灵敏度,有时也称为响应值。对使用者来讲,老是 希望HPLC仪器有较高的灵敏度,导致 灵敏度高,本来导致 对等量的同一样品进行检测时,仪器有较大的输出信号。但会 ,灵敏度的高低,不让能表示HPLC仪器的检测能力。只有检出限,里能 表示仪器的最大检测能力。

HPLC灵敏度的测试妙招:主要根据信噪比的定义进行测试。一般取信号等于或大于噪声2倍时的检测量或浓度(信号速度)作为HPLC的信号大小。信号与噪声二者相除即为仪器的信噪比(灵敏度,但会 要求S/N≧2)。

2、检测限测试妙招

讲HPLC的指标、给出HPLC的谱图,应该实事求是的给出使用的灵敏度量程(一般使用最灵敏量程),给出样品浓度(一般是噪声的3倍左右),里能 说明仪器的检测限或灵敏度。

3、光学类检测器噪声的测试妙招

HPLC的噪声是一种生活生活与被测样品无关的、随机输出的信号。国际上对噪声的定义、测试妙招各异。相似于:美国材料学好制订的测试标准(ASTM),规定噪声分为长噪声、短噪声、和超短噪声一种生活生活。长噪声是指每小时内有6个至500个变化周期的噪声,什么都有有,测定时间大约 应该测试一小时;短噪声是指每小时内一个 至10个变化周期的噪声,什么都有有,测定时间大约 应该测试10分钟至500分钟内;超短噪声是指每分钟内有10个以上的变化周期的噪声,什么都有有,测定时间应该大于1分钟。

从使用者的高度看,噪声又分为静态噪声和动态噪声。其测试妙招如下:

1)静态噪声测试:冷态开机(关机2小时后开机),预热500分钟,连续测试1小时。在这1小时里,任取10分钟(含晒 最差的峰-峰值),在这10分钟里取峰对峰值(P-T0-P)的最大值,但是仪器的噪声。但会 ,10分钟里的峰对峰(P-T0-P)值,不同于10分钟里的任一地方的峰-峰(P-P)值,即:“10分钟里的峰对峰”值,不等于瞬时的峰-峰(P-P)值,测试数据前面应加“±”符号。

注意:开机500分钟后,仪器调整到最灵敏度档(如:对量程为0.005-3.0AUFS的仪器,取0.005AUFS,即纵坐标设置为0.005A);设置波长λ=2500nm(找不到人设置5000 nm,但最好测试2500 nm);设置0 Abs(即时间扫描,吸光度从0点刚开始英文英文测试);光谱速度(SBW)=2nm(固定光谱速度的仪器不需挑选)。

在上述条件下,连续测试1小时(用仪器上的CRT指示输出,或用数字电压表监测)。在1小时内,任取10分钟的峰对峰值(P-T0-P),其最大者前面加“±”符号,即是仪器的噪声。目前,国际上大多数科技工作者,基本上采用你这俩 妙招测试HPLC仪器的静态噪声。

你这俩 科技工作者,认为在10分钟的峰对峰值(P-T0-P)前导致 要加“±”符号,就应对峰-峰值的绝对值先除“2”。你这俩 做法是不妥的,会低估仪器的噪声。导致 噪声是随机的,导致 是“+”值也都需但是“-”值。

上述仪器条件的设置,在你这俩 仪器上是需要的,导致 导致 计算机的发展和普遍应用,什么都有有仪器的坐标设置,完全由仪器的计算机自动设置。

2)动态噪声测试:

作者在研发检测器和使用HPLC时所采用的测试动态噪声妙招如下:连接恒流泵、液相色谱分离柱和检测器。在恒流泵和检测器含晒 移动相(流动相)流动。

具体操作妙招如下:

冷态开机,预热500分钟,设恒流泵的流速1mL/min;检测器设置:仪器调整到最灵敏度档(如:0.005AUFS;即纵坐标设置为0.005AU);波长λ=2500nm(找不到人设置5000 nm,但最好测试2500 nm)、0 Abs(即时间扫描,吸光度和时间都从0点刚开始英文英文测试),光谱速度(SBW)=2nm(固定光谱速度的仪器只有挑选),连续测试1小时,都需要用仪器上的CRT指示噪声在这1小时里,任取10分钟(含晒 最差的峰-峰值),在这10分钟里取峰对峰值(P-T0-P)的最大值,但是仪器的噪声。但会 ,10分钟里的峰对峰(P-T0-P)值,不同于10分钟里的任一地方的峰-峰(P-P)值,即:“10分钟里的峰对峰”值,不等于瞬时的峰-峰(P-P)值。测试数据前面应加“±”符号。目前,国际上基本上采用你这俩 妙招测试HPLC仪器的动态噪声。但会 ,为了节省时间,也都需要在漂移测试的基础上检测噪声。但会 开机时间就完全一定会500分钟,但是2小时。但是所得测试数据稍小于开机500分钟的数据(但会 ,给出数据需要说明妙招),数据外理妙招仍如上所述。

3)目前国内外的HPLC制造商,往往在仪器样本上给出的完全一定会检测器的静态噪声,一起注明了仪器的情况表(检测器空池)。但是做,对于使用者了解整个仪器系统中的检测器性能有利,也是都需要的。但会 不符合使用者的总体要求,导致 使用者的总体要求是:整个HPLC系统(包括泵、柱、检测器)占据 使用情况表(动态)的情况表下,整机的噪声有多大。什么都有有,作者认为静态噪声都需要给出,也都需要不给出,但会 动态噪声需要给出。

注意:噪声测试时,国际接轨的做法是在5000nm。但会 你这俩 厂商却给出700nm处测试的噪声,这也是不对的。导致 波长短,能量大;5000nm处的能量比700nm处大,什么都有有在700nm处测试的噪声,数据会偏小,数据不真实。

4)中国的HPLC国家标准(2011版)和计量检定规程JJG705-5002也规定了噪声的测试妙招,但会 分别都还有你这俩 值得推敲的现象,请让没找不到人歌词 歌词 歌词 每所有人参阅。

5)这里不得劲需要提出的是:目前你这俩 国外HPLC生产厂商,为了吸引用户,制造了你这俩 违背仪器学理论的指标。相似于:国外某厂商,在招标中给出HPLC的噪声时,先采用计算机对噪声进行平滑,但会 采用最几瓶程测试,结果给出的HPLC噪声非常小、谱图基线非常平直、谱峰尖而陡直,给人的印象是世界一流的HPLC。觉得不然,给出的数据和谱图完全一定会虚假的。导致 用盲样进行比对测试,导致 让没找不到人歌词 歌词 歌词 的HPLC的噪声大,信噪比差,灵敏度差,什么都有有立即败下阵来。

我国三聚氰胺国标的建立过程中的比对测试结果但是找不到,专家们从三家公司(两家外企,一家国产仪器公司(普析通用公司))的一种生活生活HPLC全方位比对测试的结果(标样由国家标物中心提供)中,最后挑选了国产北京普析通用的早期HPLC产品L6作为国家建标的仪器(L6是《原料乳三聚氰胺快速测定--液相色谱法》国家标准中采用的唯一国产仪器),其根本导致 是L6的比对测试数据准确可靠、噪声小、S/N高、性价比高等等。

4、稳定性(基线漂移和重复性)测试妙招:

这里包括仪器的静态基线漂移和动态基线漂移的测试妙招:

一般来说,使用者不关心单个检测器的静态指标,什么都有有,都需要不专门测试检测器的静态基线漂移。但会 ,作者认为设计、制造者应该测试静态基线漂移你这俩 指标,测试妙招与测试整机(系统)的动态基线漂移完全相同。

动态基线漂移测试妙招如下:冷态开机,预热2小时,连续测试1小时。1小时内的最大最小值之差但是动态漂移。(完全一定会测试更长时间的,相似于作者在FLD检测器研发时,为了考察仪器的长时间漂移,连续测试48小时,仪器的漂移小于5mV)。

5、重复性及其测试妙招:

与漂移测试妙招相同,对仪器进行多次测试(作者认为一般是5-7次),其数据的符合程度但是重复性,一般用RSD表示。

6、量程范围及其测试妙招

1)定义

仪器能适用测量的范围或仪器能满足测量要求的范围叫量程范围。其表示妙招为AUFS(Absorbance Unit Full Scale)或AU/FS(Absorbance Unit/Full Scale)。500年代但是,完全一定会什么都有找不到人用OD(光密度)你这俩 概念表示Abs(Absorbance),即用ODFS来表示UVD的量程,但会 OD不符合光对物质吸收的物理概念,不符合仪器学理论,什么都有有,目前国际上导致 废除“OD”概念,只有再使用“ODFS”了。

在实际的日常分析工作中,完全一定会化学工作者用具体的化学物质来描述HPLC的量程。但会 不同物质,导致 摩尔吸光系数不同,表现出的灵敏度但是同,什么都有有作者认为用具体的化学物质来描述HPLC的量程不符合仪器学理论的要求。作者认为,给出AUFS最大约 ,其最大优点是你这俩 表示妙招与样品的性质无关,便于比较同一类型检测器的性能优劣。但会 你这俩 表示妙招对使用者来说不大直观、不大方便。目前,国际上的HPLC仪器的量程范围一般为:0.005-2.5AUFS(相似于Waters的HPLC)。少数优质仪器的下限为0.001AUFS,但会 你这俩 仪器给出0.001-3.0AUFS的量程是有水分的,导致 UVD的杂散光一般都比较大,而杂散光是光吸收类分析仪器主要分析误差的来源,它主要限制被分析样品浓度(吸光度)的上限。什么都有有,HPLC的UVD给出0.001-3.0AUFS的量程一般是不准确的。

目前,国内外什么都有有HPLC仪器的UVD生产厂商不给仪器的量程,这是不妥的。导致 ,不给量程范围本来导致 他不知道检测器的灵敏度(下限),他不知道2个吸光度时仪器能达到满度。当然,目前有什么都有有HPLC仪器的UVD生产厂商,给出了仪器对某一物质的最小检测浓度或最小检测量,这在一种生活生活程度上也都需要反映仪器的灵敏度,但会 对使用者来说,比较方便、比较直观。但会 ,你这俩 表示妙招但是对某一物质而言,不得劲是会带来样品外理产生的误差、容易低估仪器噪声的影响,但会 ,从仪器学理论的高度来看是不科学的。

2)量程范围测试妙招

目前,国际上对HPLC的UVD的量程范围设计指标,一般在0.005-3.0AUFS内。作者在研制HPLC的UVD检测器时,用原上海大华仪表厂生产的XWT-204记录仪的1V档测试。当对数放大器的差分放大器的总输出为1V时,记录仪满度(5000格)。当仪器的有效光电信号从0.005-3.0V时,均可保证对数放大器的输出为1V;此时,你这俩 0.005-3.0V对应的吸光度为0.005-3.0Abs。要求从0.005-3.0Abs时,光度准确度都能保证在1%以内(即1V±10mv)。找不到测量3次并取均值,即是HPLC的量程范围(0.005-3.AUFS)。

目前,国内外你这俩 制造商都用萘导致 蒽来测试HPLC系统的灵敏度,你这俩 做法也都需要,但会 从仪器学理论高度考量,作者认为不科学。导致 :①、只有给出仪器的测量范围,只有给出萘的最小检测浓度;②、试样的配制会带来什么都有有误差;③、你这俩 妙招所作的测试,实际上是计算出来的灵敏度,而完全一定会测试出来的真正的灵敏度,只有反应仪器真正的灵敏度。导致 实际测试,肯定比计算的数据大什么都有有。④、不与国际接轨,不便比较不同仪器的性能。虽说近几年国内外采用此妙招的科技工作者比过去多,但会 只有掩盖妙招的局限性。什么都有有,妙招还是给出仪器的测量范围。

还找不到人用静态噪声的2倍或3倍来计算最小检测浓度,但是计算出来的结果,同样是不真实的。导致 从仪器学理论高度来看,一般在正常情况表下,最小检测浓度是在系统占据 动态的情况表下测试的,什么都有有计算最小检测浓度就需要用动态噪声,而只有用静态噪声。

还找不到人测试HPLC的最小检测浓度时,采用你这俩 计算公式(如:Cmin=2NC/H×20,式中:Cmin为最小检测浓度,N为仪器的噪声;C为浓度,H为峰高),计算时不考虑移动相的流速,这是不妥的。不考虑移动相的流速或计算公式中加在移动相的流速,本来导致 是静态的最小检测浓度,而使用者需要的是系统的动态最小检测浓度。什么都有有作者认为你这俩 计算妙招很不合理,对使用者来讲是找不到意义的,你这俩 计算妙招不可采用。

No.4、HPLC仪器的最新进展

1、二维及多维液相色谱仪的发展:美国EKSIGENT公司和日本KYA TECH公司生产的纳升级二维高效液相色谱仪,其组合了纳米微柱和二维液相色谱技术,可直接用于蛋白质组学、基因组学研究工作中。

2、毛细管和纳升高压液相色谱仪的发展,美国DIONEX公司生产Ulti Mate毛细管和纳升高效液相色谱仪,可进行微柱、毛细管柱和纳升柱一种生活生活微柱液相色谱分析。

3超高压液相色谱仪(UPLC)自从5004年WATERS公司推出ACQUITY UPLC后,JASCO、AGILENT、THERMO-FISHER SCIENTIFIC、SHIMADZU、DIONEX、HITACHI、上海通微等都先后推出了每所有人的超高效液相色谱议。

4新型的电喷雾检测器的问世,它是最新的质量检测器之一,其工作原理如下图:

淋洗液从HPLC柱子进入Corona(1)→在气腔中被氮气或空气雾化(2)→小液滴进入干燥管(3)→大液滴进入废液管(4)→干燥的颗粒进入混合腔(5)→另一路气流经过带电Corona体(6)→带电氯化氯化氢二氧化碳体和干燥的颗粒混合使颗粒带电(7)→离子阱把多余的电荷去除(8)→带电颗粒进入挂接器,电荷被高灵敏度静电计测量(9)→信号传输到色谱数据软件(10)

5新型的HPLC仪器不断问世

目前,HPLC仪器面临三大挑战:高速度、高灵敏度、高分离速度。什么都有有,近几年各国的科技工作者都在得劲视对HPLC仪器的研发。近几年,我国的有关生产厂商在这方面取得了令人瞩目的成就,相似于:

1)浙江福立分析仪器股份有限公司,从HPLC的色谱柱填料你这俩 核心部件入手,研发成功了优质的、新型的LC5190超高效液相色谱仪(UPLC)。

什么都有有UPLC采用2微米填料的分离柱,柱效比常规HPLC提高了3倍,柱压上升了9倍。但会 ,导致 色谱柱纵向温度梯度分布改变,导致 色谱峰增宽、分离速度下降,有时一定会引起出峰顺序的变化。浙江福立分析仪器股份有限公司突破了一系列关键技术、采用了多种专利技术:让没找不到人歌词 歌词 歌词 采用3微米的新型核壳型分离填料色谱柱,使系统压力降低到常规HPLC范围,外理了2微米分析柱的不足英文,保证了UPLC超高效的分离分析结果的一起,降低了柱压,研发成功了全新的LC5190超高效液相色谱仪。该仪器的理论塔板数与采用2微米的全多孔型柱效相同,但会 压力只有其1/2左右。不得劲是仪器的性价比、长期稳定性、可靠性等都提高了,维修也更加简便了。该仪器的高精度输液系统、低残留进样系统、精准的温控柱温箱和高灵敏度紫外检测器、荧光检测器等保证了仪器的先进性、可靠性。仪器具有智能化工作站系统,都需要全面满足用户的各种应用需求,符合GMP/GLP要求。

2)上海伍丰公司推出了EX1700s-HPLC超快速高效液相色谱仪

该仪器为国内最早推向市场的超快速高效液相色谱仪,与常规HPLC相比,分离能力强,出峰对称性更好,基线更稳定,分辨率更高,分析时间大大缩短,降低了客户成本。

该仪器的输液系统最大输出压力:500MPa,流量范围:0.001-5.000mL/min;流量设定值误差:Ss≤±1%(水,20℃,1mL/min,10MPa);Ss≤±2%(水,20℃,1mL/min,40MPa)。流量稳定性误差:SR≤0.3%(1mL/min)(10MPa)。

3)上海伍丰推出了第三代LC-5000液相色谱仪

第三代LC-5000可挑选分析型系统、半制备型系统、制备型系统。新增全新溶剂管理器,可实现在二元梯度系统基础上轻松切换至4-8种溶剂,并可选配脱气单元及柱温箱,大大提升用户体验。可挑选手动进样或自动进样系统,数据工作站分析软件可根据客户需求提供一个 版本的挑选,符合GMP、FDA、3Q等认证需求。

4)上海通微公司的高效微流电色谱仪和定量毛细管电泳仪问世

高效微流电色谱仪为国家科技部“十二五”重大攻关项目,是国际首创的一种生活生活新型HPLC仪器;在柱效、分离速度等什么都有有方面都优于UPLC,其柱效比UPLC高10倍、5秒钟都需要分离四个芳香烃(一般HPLC需要10-20秒)。该仪器总体优于UPLC,又是一个 国际首创。定量毛细管电泳仪也是国际首创(一般毛细管电泳仪,定量分析精度很差)。

HPLC仪器的进展发展放慢,远不止如上所述。因篇幅所限,此不赘述。

No.5、2个有关现象

1、分析仪器和仪器分析工作者应该“不忘每所有人的初心,牢记每所有人的使命”。分析仪器制造者的初心是那此?应该是为用户服务,做出的仪器质量好,稳定可靠,能满足使用者的使用要求。分析仪器工作者的使命是那此?应该是做出的仪器好用,质量稳定可靠。什么都有有,分析仪器制造商应该尽量到用户中去,认真去了解用户的需求,仪器制造商需要将仪器专业技术与仪器应用技术紧密结合,但是,仪器制造商里能 作出优质仪器、里能 提供可靠性好的仪器,里能 保证仪器使用者得到最佳分析检测结果。

仪器使用者的初心是那此?应该是得到最佳分析测试数据。仪器使用者的使命是那此?但是用好仪器,认真学习或搞清楚仪器的性能指标的物理意义、对分析误差的影响,认真挑选仪器条件、认真做好样品前外理,努力将仪器用在最佳条件下。但是,里能 得到最佳分析检测数据,里能 得到分析误差最小的分析检测结果。

我国目前的现状是:做仪器的人,他不知道使用者在如可使用仪器,他不知道使用者对仪器的具体要求,什么都有有,做出的仪器就不大好用导致 不好用,这是制造者与使用者脱节的导致 。而使用者他不知道制造者在如可制造仪器,他不知道仪器的性能指标的物理意义、对分析误差的影响,什么都有有,买仪器需要求指标越高越好,结果根本用不上。实验室里仪器堆得满满的,但会 什么都有有仪器用不上,造成大大的浪费。

什么都有有,不忘初心,牢记使命,制造仪器和使用仪器的科技工作者紧密结合非常重要。

2、找不到理论指导的仪器研发跟生产工作完全一定会闭着眼睛抓麻雀,一定要重视仪器学理论;

从事HPLC仪器研发和使用的科技工作者,只有重视仪器学理论里能 做好HPLC仪器、里能 用好HPLC仪器。仪器学理论是一把金钥匙,一通百通,它都需要使你做出稳定可靠的优质HPLC仪器,使你在使用HPLC仪器时,里能 调整好最佳仪器条件、保证得到准确可靠的分析检测数据。

目前我国的20多家HPLC仪器生产商和广大HPLC用户,对仪器学理论重视不足英文,基本上不了解HPLC各项性能指标的物理意义和它们对分析误差的影响,不得劲是不懂得HPLC仪器的各项指标如可影响分析检测数据的误差。这是中国分析仪器及其应用落后国外先进水平或与国外占据 差距的主本来导致 之一。但会 ,仪器学理论非常值得广大科技工作者们重视。

3、从仪器学、分析化学和应用实践的要求来讲,目前国产HPLC要求基本上都能满足使用要求,但会 深受国外科技工作者青睐。国产高档HPLC产品导致 出口到国外(包括发达国家和发展中国家);而国人却盲目迷信进口HPLC,几瓶进口国外的HPLC,中国的HPLC主市场仍被外国仪器占领,觉得令人费解。中国的科技工作者,应该从民族高度看国产仪器和进口仪器。在购买、使用各类HPLC仪器时,应该要有爱国情怀,要有骨气,要大胆使用能满足使用要求的国产仪器。

No.6、主要参考文献

1)李昌厚著,高效液相色谱仪器及其应用,北京:科学出版社,2014

2)李昌厚著,仪器学理论与实践,北京:科学出版社,5008

3)李昌厚著,紫外可见分光光度计仪器及其应用,北京:化学工业出版社,2010

作者简介:

李昌厚,男,中国科学院上海生物工程研究中心原仪器分析室主任、兼生命科学仪器及其应用研究室主任、教授、博士生导师、华东理工大学兼职教授;终身享受国务院政府特殊津贴。

主要研究方向:分析仪器及其应用研究;长期从事光谱仪器(紫外吸收光谱、原子吸收光谱、旋光光谱、分子荧光光谱、原子荧光、拉曼光谱等);色谱仪器(液相色谱、气相色谱等)及其应用研究;不得劲对《仪器学理论》等有深入研究。

以第一完成者身份,完成科研成果15项。由中科院组织专家鉴定;其中13项达到鉴定时国际上相似于仪器的先进水平,2项填补国内空白;以第一完成者身份获得国家和省部级(中国科学院、科技部、上海市)科技成果奖5项(含国家发明家 奖1项);发表论文183篇,出版专著5本;曾任中国仪器仪表学好分析仪器分会第五届、第六届副理事长、国家认监委计量认证/审查认可国家级常任评审员、国家科技部“十五”、“十一五”、“十二五”和“十三五”重大仪器及其应用专项的技术专家组成员或组长、上海市科学仪器专家组成员、《光学仪器》副主编、《生命科学仪器》副主编、《光谱仪器与分析》副主编等十多个学术团体的领导职务。

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